产品简介
EZ-Assembly One-Step Cloning Kit是一款高效的一步法无缝克隆试剂盒，可通过单个反应将一个DNA片段插入到任何载体的任何位点，不产生多余的碱基序列。本试剂盒操作简单，只需制备线性化载体和扩增含有载体末端同源序列（15 ~ 20 bp）的插入片段，将两者按照一定比例混合，加入2× Fusion Mix，50°C反应5 min即可进行转化，完成定向克隆。试剂盒中的2× Fusion Mix含同源重组酶及高度优化的缓冲液体系，具有很高的重组效率和克隆成功率。
产品组分
组分 |
EZ1101-01(5 Rxns) | EZ1101-02(20 Rxns) | EZ1101-03(40 Rxns) |
2× Fusion Mix*1 | 55 μl | 220 μl | 440 μl |
注:*1. 包含同源重组酶及高度优化的缓冲液体系。
保存条件
本产品建议置于-20°C保存。过期日期详见产品标签中有效期信息。
自备材料
片段扩增所需模板及引物、线性化载体、高保真酶、感受态细胞（如DH5α Competent cell）、ddH2O、PCR管、PCR仪等。
实验流程
1. 目标载体的线性化：通过酶切或反向PCR获得线性化载体。
2. 插入片段的扩增：由PCR制备，所用扩增引物在设计时需在其5’端添加同源序列（图中以黄色和蓝色标记），使得扩增产物与线性化载体之间具有15 ~ 20 bp的同源序列。
3. 同源重组反应：将线性化载体和插入片段按比例混合，50°C反应5 min即可完成重组反应。
4. 同源重组产物转化：同源重组产物直接进行转化，平板上会形成单克隆供后期阳性克隆检测。
代表性实验结果
1.使用EZ-Assembly One-Step Cloning Kit进行插入一个片段的同源重组反应及后续的大肠杆菌转化，得到结果如下图。可以看出，本试剂盒具有很高的重组效率以及克隆成功率。
A. 插入一个片段的重组产物转化平板。载体pGADT7（8.0 kb）通过ECORⅠ和BamHⅠ双酶切线性化，插入一个2200 bp的片段，线性化载体与插入片段的摩尔比为1:2，50°C反应5 min。
B. 插入一个片段的菌落PCR鉴定结果，挑取A图10个单克隆，PCR产物大小均为2200 bp，阳性率100%。
相关详细信息，请查看产品说明书。
