EZ-press Cell to cDNA Kit PLUS (for microRNA) (EZB-miRT1)

产品简介

    本产品为miRNA的逆转录提供了一种简单快速的方法，无需RNA分离即可从培养细胞中获得cDNA。qPCR反应只需要设计每个目的miRNA的特异性正向引物。

产品组分

保存条件

本产品所有组分置于-20°C保存。过期日期详见产品标签的有效期信息。

实验流程

注意事项

1.  建议实验开始前，先解冻Cell Lysis Buffer，解冻后需颠倒几次使之充分混匀，然后放在室温备用，请勿涡旋振荡。

2.  建议优先使用24孔板培养细胞，48或96孔板亦可，否则需要用胰酶消化后收集到EP管中进行裂解；对于悬浮细胞，需要离心去除培养基，用PBS重悬后取一定数量的细胞转移到EP管中，离心去除PBS后再加入裂解液裂解。

3.  细胞密度：对于24孔板培养的细胞，建议收细胞时细胞密度达到50% ~ 100%为佳（约20万 ~ 40万），30万~ 40万左右最好，以使所加裂解液能完全覆盖孔底

4.  细胞从培养箱中取出后建议放在室温，切勿放在冰上，以免影响细胞状态。

5.  初次使用时建议至少多养一个孔，以便在使用本试剂盒做实验时对细胞进行计数，之后可参考估数图进行估数。

6.  所有试剂使用前须混匀。本试剂安全无毒，建议在开放环境进行实验即可；如果在通风橱内操作，建议不要开风机，以免吹干细胞导致RNA严重降解。

代表性实验结果

1. 使用EZ-press Cell to cDNA Kit for microRNA试剂盒处理A549细胞，得到的cDNA用针对U6、miR-1以及miR-21的qPCR引物检测这几个microRNA表达的结果

如图所示，miRNA的扩增曲线和熔解曲线及Ct值均非常良好，显示使用此试剂盒能够很好地检测microRNA的表达。

相关详细信息，请查看产品说明书。