产品简介
EZ-press Cell to cDNA Kit PLUS II提供了一种简单快速的方法，无需RNA分离即可从培养细胞中获得cDNA。本产品得到的cDNA可在-80°C储存长达3个月且Ct值无明显变化，可很好的替代TRIzol法进行基因表达定量分析。与TRIzol法相比，本产品具有简单快速、稳定性高和灵敏度强等特点，从培养细胞到cDNA最快仅需25 min，最低检测下限为1000个细胞。
产品组分
组分 | B0003C-S (10 Rxns, 20μl/Rxn) | B0003C (100 Rxns, 20μl/Rxn) |
Cell Lysis Buffer | 1.1 ml × 2 | 5.5 ml × 4 |
gDNA Remover | 22 μl | 220 μl |
4× Color CRT Mix | 55 μl | 550 μl |
ddH2O (Nuclease-) | 1 ml | 1 ml × 2 |
保存条件
本产品的所有组分建议置于-20°C保存。过期日期详见产品标签中有效期信息。
产品特点
简单快速：只有2步（细胞裂解、逆转录），仅需25分钟左右即可得到cDNA。
基因组残留少：试剂盒中配有1管gDNA Remover试剂，室温处理5分钟，即可有效去除95%以上的残留基因组DNA。
所需样品少：最低可提取5000个细胞的RNA（对于更少的细胞数建议用B0011这个试剂盒），一般细胞数是5000 ~ 50万个细胞。
节约成本：试剂盒所需的细胞数较少，所以大大节省血清和药物等试剂。
安全无毒：不使用苯酚、氯仿、异丙醇、DEPC水等对身体有害的物质。
自备材料
水平摇床（可选）、RNase-free PCR管或八连管、RNase-free枪头和PCR仪等。
实验流程
注意事项
1. 建议优先使用24孔板培养细胞，48或96孔板亦可，否则需要用胰酶消化后收集到离心管管中进行裂解；对于悬浮细胞，需要离心去除培养基，用PBS重悬后取一定数量的细胞转移到无酶离心管中，离心去除PBS后再加入裂解液裂解。
2. 细胞密度：对于24孔板培养的细胞，建议收细胞时细胞密度达到50%~100%为佳（约20万~40万），30万~40万左右最好，以使所加裂解液能完全覆盖孔底。可参考细胞密度与裂解液添加量参考表。
3. 细胞从培养箱中取出后建议放在室温，切勿放在冰上，以免影响细胞状态。
4. 初次使用建议至少多养一个孔，以便在使用本试剂盒做实验时对细胞进行计数，之后可参考估数图进行估数。
5. 所有试剂使用前须混匀。本试剂安全无毒，建议在开放环境进行实验即可；如果在通风橱内操作，建议不要开风机，以免吹干细胞导致RNA严重降解。
6. 对于一些细胞体积与常见细胞（比如293T细胞）的体积差异极大的细胞种类，建议进行预实验，确定一个合适的裂解液比例后再进行正式实验。
7. 建议实验开始前，先解冻Cell Lysis Buffer，解冻后需颠倒几次使之充分混匀，然后放在室温备用，请勿涡旋振荡。
8. 为了您的安全和健康，请穿戴实验服、一次性乳胶手套、一次性口罩、使用RNase-free耗材，避免RNase污染。
细胞密度与裂解液添加量参考表
培养板 | 24孔板 | 96孔板 |
细胞密度 | 20~30% | 35~45% | 55~65% | 80~100% | 10~15% | 30~45% | 60~80% | 90~100% |
细胞数 | ~10万 | ~20万 | ~30万 | ~40万 | ~50万 | ~2万 | ~5万 | ~10万 | ~15万 |
裂解液（μl） | 80 | 100 | 150 | 200 | 200 | 16 | 40 | 50 | 75 |
裂解液用量比例 | 80 μl /10万细胞 | 40 μl~50 μl /10万细胞 | 80 μl /10万细胞 | 50 μl /10万细胞 |
代表性实验结果
由上图可见，EZ-press Cell to cDNA Kit PLUS II得到的cDNA的qPCR结果与TRIzol方法高度一致（线性相关系数R2=0.9973)。
相关详细信息，请查看产品说明书。
