EZ-press Cell to cDNA Kit PLUS II (B0003C)

EZ-press Cell to cDNA Kit PLUS II (B0003C)

产品类型:Cell to cDNA 系列

货号:B0003C

规格: 100 Rxns, 20 μl/Rxn

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产品简介

    EZ-press Cell to cDNA Kit PLUS II提供了一种简单快速的方法,无需RNA分离即可从培养细胞中获得cDNA。本产品得到的cDNA可在-80°C储存长达3个月且Ct值无明显变化,可很好的替代TRIzol法进行基因表达定量分析。与TRIzol法相比,本产品具有简单快速、稳定性高和灵敏度强等特点,从培养细胞到cDNA最快仅需25 min,最低检测下限为1000个细胞。

产品组分

   组分                         

B0003C-S

(10 Rxns, 20μl/Rxn)

B0003C

(100 Rxns, 20μl/Rxn)

Cell Lysis Buffer

1.1 ml × 2

5.5 ml × 4

gDNA   Remover

24 μl

240 μl

4× Color CRT Mix

55 μl

550 μl

ddH2O (Nuclease-)

1 ml

1 ml × 2

保存条件

本产品的所有组分建议置于-20°C保存。过期日期详见产品标签中有效期信息

产品特点

  • 简单快速:只有2步(细胞裂解、逆转录),仅需25分钟左右即可得到cDNA

  • 基因组残留少:试剂盒中配有1gDNA Remover试剂,室温处理5分钟,即可有效去除95%以上的残留基因组DNA

  • 所需样品少:最低可提取5000个细胞的RNA(对于更少的细胞数建议用B0011这个试剂盒),一般细胞数是5000 ~ 50万个细胞。

  • 节约成本:试剂盒所需的细胞数较少,所以大大节省血清和药物等试剂。

  • 安全无毒:不使用苯酚、氯仿、异丙醇、DEPC水等对身体有害的物质。

自备材料

水平摇床(可选)、RNase-free PCR管或八连管、RNase-free枪头和PCR仪等。

实验流程

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注意事项

1. 建议优先使用24孔板培养细胞,4896孔板亦可,否则需要用胰酶消化后收集到离心管管中进行裂解;对于悬浮细胞,需要离心去除培养基,用PBS重悬后取一定数量的细胞转移到无酶离心管中,离心去除PBS后再加入裂解液裂解。

2. 细胞密度:对于24孔板培养的细胞,建议收细胞时细胞密度达到50%~100%为佳(约20~40万),30~40万左右最好,以使所加裂解液能完全覆盖孔底。可参考细胞密度与裂解液添加量参考表。

3. 细胞从培养箱中取出后建议放在室温,切勿放在冰上,以免影响细胞状态。

4. 初次使用建议至少多养一个孔,以便在使用本试剂盒做实验时对细胞进行计数,之后可参考估数图进行估数。

5. 所有试剂使用前须混匀。本试剂安全无毒,建议在开放环境进行实验即可;如果在通风橱内操作,建议不要开风机,以免吹干细胞导致RNA严重降解。

6. 对于一些细胞体积与常见细胞(比如293T细胞)的体积差异极大的细胞种类,建议进行预实验,确定一个合适的裂解液比例后再进行正式实验。

7. 建议实验开始前,先解冻Cell Lysis Buffer,解冻后需颠倒几次使之充分混匀,然后放在室温备用,请勿涡旋振荡。

8. 为了您的安全和健康,请穿戴实验服、一次性乳胶手套、一次性口罩、使用RNase-free耗材,避免RNase污染。

细胞密度与裂解液添加量参考表

培养板

24孔板

96孔板

细胞密度

20~30%

35~45%

55~65%

80~100%

10~15%

30~45%

60~80%

90~100%

细胞数

~10

~20

~30

~40

~50

~2

~5

~10

~15

裂解液(μl

80

100

150

200

200

16

40

50

75

裂解液用量比例

80 μl /10万细胞

40 μl~50 μl /10万细胞

80 μl /10万细胞

50 μl /10万细胞

代表性实验结果

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由上图可见,EZ-press Cell to cDNA Kit PLUS II得到的cDNAqPCR结果与TRIzol方法高度一致(线性相关系数R2=0.9973)。



相关详细信息,请查看产品说明书。