产品简介
本试剂盒是直接以细胞裂解产物为模板进行探针法RT-qPCR检测的试剂盒。使用基因特异性引物（GSP），使逆转录和qPCR反应在同一个反应体系中完成，可在单次多通路反应中对多达三种不同的RNA/DNA靶标进行高灵敏度和高度重复性的检测。
本试剂盒含有四管试剂：Cell Lysis Buffer N2、10× Probe C-to-Ct Enzyme Mix II、5× Probe C-to-Ct Buffer II-R2和RNase free ddH2O。无需提取RNA，只需用本试剂盒提供的裂解液裂解细胞，然后在反应体系中加入酶、Buffer、引物、探针和适量的细胞裂解产物，再加RNase free ddH2O至指定体积，即可完成逆转录和qPCR反应，无需额外的开管和移液，大大提高了检测的通量、降低了检测的时间及污染的风险。
产品组分
组分 | B0018-R2-S (100 Rxns) | B0018-R2 (500 Rxns) | B0018-R2-L (2500 Rxns) | B0018-R2-XL (10000 Rxns) |
Cell Lysis Buffer N2 | 5.5 ml | 5.5 ml × 5 | 5.5 ml × 25 | (5.5 ml × 25)/Bag × 4 |
10× Probe C-to-Ct Enzyme Mix II*1 | 220 μl | 1.1 ml | 1.1 ml × 5 | (1.1 ml × 25)/Bag |
5× Probe C-to-Ct Buffer II-R2*2 | 440 μl | 1.1 ml × 2 | 1.1 ml × 10 | (1.1 ml × 50)/Bag |
Nuclease free ddH2O | 1 ml | 1 ml × 2 | 10 ml × 2 | (10 ml × 10)/Bag |
注：*1. 包含M-MLV突变体逆转录酶、RNase Inhibitor和热启动DNA聚合酶；*2. 包含dNTPs、低浓度的ROX2及高度优化的缓冲液体系。
保存条件
本产品所有组分置于-20°C避光保存。过期日期详见产品标签的有效期信息。
适用的仪器型号（如果仪器不在下表中，请使用B0018-R1）
ABI 7500, 7500 Fast, Quant-Studio 1, 3, 5, 6, 7, 12K Flex, Dx, ViiA™7; Aligent AriaMx, Stratagene MX4000™, MX3000P™, MX3005P™. |
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon 2, Chromo4™; Roche LightCycler™ 96, Roche LightCycler™ 480; Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2s; Illumina Eco qPCR; Qiagen/Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000; Thermo Scientific PikoReal Cycler; Analytikjena qTOWER 3G; Cepheid SmartCycler®; Bioer Linegene 9600; HONGSHI SLAN®-96P. |
注意事项
1. 反应液的配制请使用RNase-free或者灭过菌的吸头、EP管等，尽量避免污染。
2. 建议优先使用24孔板培养细胞，48或96孔板亦可，否则需要用胰酶消化后收集到EP管中进行裂解；对于悬浮细胞，需要离心去除培养基，用PBS重悬后取一定数量的细胞转移到EP管中，离心去除PBS后再加入裂解液裂解。
3. 关于细胞密度：对于24孔板培养的细胞，建议收细胞时细胞密度达到50 ~ 100%为佳（约20 ~ 40万），30万~ 40万左右最好，以使所加裂解液能完全覆盖孔底。
4. 关于裂解液的用量：为充分裂解细胞，建议每10万细胞使用不少于50 μl 的Cell Lysis Buffer N2（裂解液）进行裂解；同时为简化操作，在进行高通量细胞裂解和RT-qPCR检测时，可按照96孔板每个细胞培养孔加25 ~ 50 μl裂解液、384孔板每个孔加15 ~ 20 μl裂解液的用量进行细胞裂解。
5. 细胞从培养箱中取出后建议放在室温，切勿放在冰上，以免影响细胞状态。
6. 初次使用建议至少多养一个孔，以便在使用本试剂盒做实验时对细胞进行计数，之后可参考估数图进行估数。
7. 本试剂安全无毒，建议在开放环境进行实验即可；如果在通风橱内操作，建议不要开风机，以免吹干细胞导致RNA严重降解。
8. 对于一些细胞体积与常见细胞（比如293T细胞）的体积差异极大的细胞种类，建议进行预实验，确定一个合适的裂解液比例后再进行正式实验。
代表性实验结果
如图所示为本试剂盒的3重探针法RT-qPCR实测结果图，分别取50 μl的Cell Lysis Buffer N2裂解1万、2万和4万的293T细胞。RT-qPCR体系为20 μl，每孔分别加入1 μl的细胞裂解产物和含3种不同引物探针的RT-qPCR预混液。
由上图可见，本试剂盒的检测结果具有高度的特异性和灵敏度。表明本试剂盒可以很好的用于以细胞裂解产物为模板进行多重探针法RT-qPCR的检测。
相关详细信息，请查看产品说明书。
